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姬姆萨染色法 编辑
染色方法
姬姆萨染色法简称姬氏染色,是用天青色素、伊红、次甲蓝混合而成的姬姆萨染料对血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等标本进行染色的染色方法。染前用蛋白酶等进行处理,然后再用姬姆萨染液染色,在染色体上,可以出现不同浓淡的横纹样着色。姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
姬姆萨染色液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质,细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质,中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境里下在电荷增多,易和伊红结合,染色为偏红,在偏三性环境里负电荷增多,易和美蓝或天青结合,染色偏蓝。所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片一定清洁,要无酸碱污染。配制顼特液一定用优质甲醇,稀释染色一定用缓冲液,冲洗一定用水应近中性,不然可导致各种细胞染色反应异常,以致于识别困难,甚至造成错误的。
具体操作步骤: ①滴加姬姆萨染色液A液(0.5〜0.8ml)于涂片上,并让 染液覆盖整个标本涂片染色1分钟;②将姬姆萨染色液B 液滴加于A液上面(滴加之量为A液的2 ~3倍)以洗耳球吹出 微风使液面产生涟漪状,使两液充分混合,染色3〜10分钟; ③水洗(冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲去,以防有沉渣 沉淀在标本上);④干燥,镜检。