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免疫电镜检查 编辑
免疫电镜检查(immuNOeletron microscopy)是免疫组织化学技术与透射电镜技术相结合,在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法。主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜检查,即抗原抗体凝集反应后,经负染色直接在电镜下观察;另一类是免疫电镜定位检查。
根据标记方法的不同,可分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标记技术和免疫胶体金技术。如免疫铁蛋白技术是将含铁蛋白通过一种低分子量的双功能试剂与抗体结合,成为一种双分子复合物,既可保留抗体的免疫活性,又具有电镜下可见的高电子密度铁离子核心,因此用铁蛋白标记的抗体可通过电镜免疫化学的方法在电镜下定位细胞中的抗原。
免疫电镜检查的操作包括抗体的制备、标本的处理、免疫标记、对照实验、结果的观察和解析。
大体检查步骤以下。
1.免疫复合物的制备:取标本0.9mL,与0.1mL适当稀释的抗血清混合,在37℃水浴上反应30分钟,在室温下反应1小时或在4℃下过夜。
2.浓缩:在17000~23000转/分下离心1.5小时,将沉淀用少许蒸馏水悬浮,用磷钨酸负染,滴入400目铜网的Formvar膜上,用滤纸吸去过量的染液。
3.电镜观察:在透射电镜下,放大40000倍观察。