免疫电镜检查 编辑

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免疫电镜检查（immuNOeletron microscopy）是免疫组织化学技术与透射电镜技术相结合，在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法。主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜检查，即抗原抗体凝集反应后，经负染色直接在电镜下观察；另一类是免疫电镜定位检查。

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基本信息

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中文名：免疫电镜检查

临床意义：对未知抗原进行早期诊断

原理

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利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合，在电子显微镜下观察，由于标准物形成一定的电子密度而指示出相应抗原所在的部位。

分类

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根据标记方法的不同，可分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标记技术和免疫胶体金技术。如免疫铁蛋白技术是将含铁蛋白通过一种低分子量的双功能试剂与抗体结合，成为一种双分子复合物，既可保留抗体的免疫活性，又具有电镜下可见的高电子密度铁离子核心，因此用铁蛋白标记的抗体可通过电镜免疫化学的方法在电镜下定位细胞中的抗原。

检查步骤

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免疫电镜检查的操作包括抗体的制备、标本的处理、免疫标记、对照实验、结果的观察和解析。

大体检查步骤以下。

1.免疫复合物的制备：取标本0.9mL，与0.1mL适当稀释的抗血清混合，在37℃水浴上反应30分钟，在室温下反应1小时或在4℃下过夜。

2.浓缩：在17000～23000转/分下离心1.5小时，将沉淀用少许蒸馏水悬浮，用磷钨酸负染，滴入400目铜网的Formvar膜上，用滤纸吸去过量的染液。

3.电镜观察：在透射电镜下，放大40000倍观察。

注意事项

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1. 为证实免疫标记结果的特异性，必须同时进行对照实验。在保证抗体的特异性的前提下，对照实验有：①用未经免疫的同种动物正常血清代替第一抗体，结果应为阴性。②不加一抗，结果应为阴性。③用不含有靶抗原的标本进行免疫标记，结果应为阴性。④对肯定含有靶抗原的标本进行免疫标记，结果应为阳性。

2. 在电镜下观察免疫标记的结果，通过标记物（胶体金、铁蛋白或酶底物）显示免疫反应部位以定位抗原的存在位置，注意区分特异性标记和背景的非特异性标记，进行正确的结果分析。

临床意义

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免疫电镜检查在检测抗原物质在显微结构中的定位、检查未知抗原进行早期诊断方面，具有重要作用。该种技术亦可用检测急性期和恢复期患者血清抗体效价变化，进行血清学诊断和流行病学调查。

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