中文名：发酵试验

外文名：Fermentationtest

领域：农业科学

材料

1. 菌株参试菌共49株, 其中大肠埃希菌、变形杆菌 、沙门菌 、志贺菌、克雷伯菌、阴沟杆菌 、类志贺邻单胞菌、非O1群霍乱弧菌、葡萄球菌、枯草杆菌、粪肠球菌各2株,假单胞菌15株(均来自本中心菌种室),产碱型革兰氏阴性杆菌12株(自粪便标本中分离)。

2. 培养基营养琼脂、营养肉汤、糖发酵基础培养基均按使用说明配制使用 。

3 单管法O/F试验培养基的配制蛋白胨2g,磷酸氢二钾0.3g,氯化钠5g,琼脂粉3g,溴麝香草酚蓝0.03g。将上述成分置于1000ml蒸馏水中,加热溶解, 校PH=7.2~7.4,分成2份,其中1份按3g/L加入葡萄糖,另一份按10g/L加入葡萄糖,然后分别分 装10×100试管,每管4ml(约占试管容量的1/2),121 °C高压蒸汽灭菌15min,直立凝固备用。

4 双管法O/F试验培养基的配制在糖发酵基础培养基内按10g/L加入葡萄糖溶解,分装10×100试管,每管3 ml,每份2支。其中1支加入液体石蜡1ml封闭液面,作为厌氧管,另一支不封液面,作为有氧管。121°C高压蒸汽灭菌15 min备用。

方法

1 培养将所试菌肉汤培养物划线接种营养琼脂,36 °C培养24~ 48h,自同一单个菌落取菌,分别接种单双管法 O / F 试验培养基,其中单管法用接种针穿刺接种至管底。同时设不加葡萄糖接种发酵型细菌和加有葡萄糖不种菌的空白对照。36°C培养24h,开始观察结果,每24h记录一次,共观察4d。

2 结果判定标准单管法结果判定标准:发酵型为产酸,整管变黄色;氧化型为表面产酸,仅培养基上部(1/4~1/2)变黄色,下部仍维持普鲁士兰色;产碱型为不产酸,全管维持普鲁士兰色不变。双管法结果判定标准:发酵型为两管均产酸变黄色;氧化型为有氧管(未封液面)产酸变黄,厌氧管(封闭液面)不产酸,仍呈普鲁士兰色;产碱型为两管均不产酸 , 维持普鲁士兰色不变。

有些细菌仅在需氧条件下有能力代谢糖产酸,称为氧化型, 而另一些细菌在需氧和厌氧条件下均能代谢糖产酸, 称为发酵型,还有些细菌在有氧或厌氧条件下均不能代谢糖类,称为产碱型。因此, 在细菌代谢葡萄糖的过程中, 给予有氧和厌氧两种环境培养,即可分辨细菌的3种代谢类型。将培养基制成半固体, 造成其表面为有氧环境, 底部为厌氧环境, 接种细菌培养后,氧化型细菌仅在培养基表面代谢糖产酸,渗透至培养基上部,使其变黄色, 而下部仍保持原普鲁士兰色 ;发酵型细菌可代谢全部糖产酸,使整管变黄。实验证明, 使用单管法进行葡萄糖氧化/发酵试验,经济、简便、易行、结果可靠,与双管法符合率为100%,而且还可通过观察细菌在半固体中的生长情况,判定其有无动力。作者认为,此法值得在细菌检验中推广应用 。