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血清碱性磷酸酶 编辑
(1)比色法:ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解,生成磷酸和游离酚,后者与4-氨基安替比林作用,并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物,其颜色的深浅与ALP活性成正比。
(2)连续监测法:ALP在碱性条件下,使磷酸对硝基苯酚(4-NPP)释放出磷酸基团,AMP参与磷酸酰基的转移,促进酶反应速率,生成游离的对硝基苯酚(4-NP),并形成黄色的醌,其吸光度的增高速率与酶活力成正比。
比色法
①0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0):称取无水碳酸钠6.36g,碳酸氢钠3.36g,4-氨基安替比林1.5g,溶于800ml蒸馏水中,移入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶内保存。
②20mmol/L磷酸苯二钠溶液:称取磷酸苯二钠(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中,冷却后加入氯仿2ml防腐,冰箱保存。此为基质液。
③铁氰化钾溶液:称取铁氰化钾2.5g,硼酸17g,分别溶于400ml蒸馏水中,混合后加水至1000ml,置棕色瓶内避光保存。出现蓝绿色应弃去。
④酚标准贮存液(1mg/ml):称取重蒸馏酚1.0g,溶于0.1mol/L盐酸中,并加至1000ml刻度。也可购买标准液。
⑤酚标准应用液(0.05mg/ml):取酚标准贮存液5ml,加蒸馏水至100ml。
连续监测法
①1.8mol/L AMP缓冲液(pH10.3):称取2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP,MW89.14)160g,加1mol/L盐酸320ml混合,加500ml新煮沸已凉的蒸馏水,调pH至10.3±0.02(30℃),并加上述蒸馏水至1000ml,置紧塞瓶中于冰箱保存。
②10.5mmol/L氯化镁溶液:称取氯化镁(MgCl2·6H2O,MW20 3.31)0.21g,溶于水中,并稀释至100ml,室温保存。
③31.5mmol/L磷酸对硝基苯酚溶液(4-NPP):称磷酸对硝基苯酚二钠盐(含6分子水,MW 371.15)120.8mg,溶于100ml蒸馏水中,置棕色瓶内于冰箱保存。
④底物缓冲液(0.84mol/L AMP,15mmol/L 4-NPP,0.5mmol/L MgCl2,pH10.3)将AMP、4-NPP和MgCl23种溶液按10∶10∶1混合,37℃预温待用。
(1)酶速率法(37℃):
成人:40~160U/L;
儿童:<350U/L;
(2)磷酸苯二钠法:
成人:3~13Kat单位;
儿童:5~30kat单位;
(3)动态法:成人:20~110U/L;
青少年:
1.男性:<750U/L;
2.女性:<500U/L;
儿童:<500U/L;
婴儿:50~240U/L。
(1)升高:
①无黄疸:肝硬化、肝细胞癌、胆管疾病(胆管癌,肝内结石)、局限性肝损害(转移性肝癌、肝脓疡、肉芽肿性肝损伤)、其他肝疾病(慢性肝炎、脂肪肝)、骨疾病(佝偻病骨软化症、或骨肉瘤)、转移性骨癌、甲状腺功能亢进症,甲状旁腺功能亢进症,慢性肾功能不全,恶性肿瘤(骨、肝转移)等。
②有黄疸:病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损害、肝炎病毒以外的病毒引起的肝损害、原发性胆汁性肝硬化、其他肝内胆汁瘀滞、阻塞性黄疸(胆管癌、胆管细胞癌、胰头癌,总胆管结石,硬化性胆管炎)。