中文名：铁蛋白

外文名：Ferritin

CAS号：79468-83-0

EINECS号：232-704-0

分子量：500kDA

铁蛋白具有耐稀酸（pH值2.0）、耐稀碱（pH值12.0）、耐较高温度（70～75℃水温下不变性）等特殊性质。在很多研究中，就是利用铁蛋白的这些特性，从动物组织中提纯出该蛋白。

蛋白质壳具有亲水性，故铁蛋白可溶于水并可溶于胞浆或血浆中，在细胞内、外液中均较稳定。铁蛋白主要是存在于细胞质中，但是在脊椎动物的线粒体和细胞核也有发现，并且在昆虫中是一种分泌蛋白。铁蛋白是体内铁的主要储存形式，其在脾脏、肝脏、骨髓中含量最高，在其它组织血清、血细胞等中也有发现。

动植物体内广泛存在的一类贮存铁的蛋白。在哺乳类动物的肝和脾中含量最多。其外径约12~14nm，空囊腔径长约6nm，外壳（即脱铁铁蛋白）由24个亚基组成，每个亚基约含163个氨基酸残基，每个分子最多可结合4500个铁原子。分子量约为450kd。结合铁的铁蛋白是“溶”于水的，血浆铁蛋白的浓度与体内储存的铁成正比。

近几年来发现肝癌还含有一种酸性的异铁蛋白，称为癌胚异铁蛋白，可能有助于早期诊断。肝癌患者治疗有效者血清铁蛋白下降，而恶化和再发者升高，持续增高则予后不良，故血清铁蛋白测定可作为疗效监测手段之一，特别是对AFP阴性的患者尤有意义。

铁蛋白以肝、脾含量较高，其中马脾脏含量最高，标记用的铁蛋白主要是从马脾脏中提取。马脾脏来源不便，可用市售铁蛋白相对分子质量45000。棕红色结晶。商品为4次结晶品，悬浮于饱和硫酸铵溶液中。一种结合铁离子辅基的蛋白质，它以脱铁蛋白为外壳，环绕着4个分开的羟化铁-磷酸盐，形成电子致密的结合型蛋白质。在制备的过程中，加入N，N-1，3-丙二胺偶合铁蛋白，可成为正离子化铁蛋白。密封、4℃保存。

纯化方法：①取1mL商品铁蛋白溶液，用1000mL蒸馏水或1%的氯化钠溶液透析3次，去除重结晶过程中残留在铁蛋白中的硫酸镉。

②200rpm离心10min，去除大的聚合物。

③3000rpm离心1~2h，使其形成铁蛋白小球，弃上清。

④用结合反应所用的缓冲液悬浮沉淀。

⑤马脾铁蛋白约含15%的低聚物，将铁蛋白溶液过4B柱，收集流出液，取后2/3峰再过一次4B柱，可获得98%的单体铁蛋白。

⑥用50%的饱和硫酸铵使铁蛋白沉淀。然后将沉淀溶于少量双蒸水中，通过透析去除硫酸铵。

1、电镜鉴定

将铁蛋白水溶液滴在有Formvar膜的铜网上用3%磷钨酸染色3min自然干燥后电镜下观察可见含4个电子致密区球型蛋白分子，外被蛋白外壳直径12nm左右，内核7.5nm。

2、抗体和铁蛋白的结合

戊二醛作为偶联剂效果较好，对抗体活性影响小。可分为一步法和二步法。

戊二醛一步法：在0.9mL的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH值7.0）中溶解15mg铁蛋白和3mg抗体，加入0.1mL戊二醛，在37℃中放置24h，加入0.01mol/L赖氨酸中止反应，反应物加入0.02%NaN₃防腐。

3、铁蛋白标记抗体的纯化

铁蛋白标记抗体后的混合液中含一些未标记的抗体蛋白等，应尽量去除。纯化方法：将标记的抗体复合物，在4℃的条件下加入1:3体积的饱和硫酸铵饱和度为25%，4000rpm离心15min，去上清将棕黄色标记的铁蛋白沉淀溶于少量0.1mol/L磷酸缓冲（pH值为7.2），过G-25柱除盐。

4、铁蛋白免疫电镜标记流程

(1)电镜包埋后标记样品取材、固定、包埋和超薄切片同包埋后免疫电镜操作流程。铁蛋白标记的抗体分子量较大，较适合于细胞表面抗原的定位研究。

(2)电镜包埋前铁蛋白标记细胞内抗原标记需对组织进行适当处理，以增强其通透性。多用包埋前间接染色法。孵育均在湿盒内进行。

操作程序如下：①将组织标本制成10~15m厚片。

②切片漂洗后，1%BSA孵育，室温30min。

③特异性抗体（第一抗体）中室温60min或4℃孵育过夜。

④PB充分漂洗3次，每次5min。

⑤铁蛋白标记的第二抗体孵育，室温30min。

⑥漂洗同上，再经戊二醛固定1h。漂洗后，1%锇酸后固定2h。其他步骤同常规电镜。

血清铁蛋白是体内含铁最丰富的一种蛋白质。肝、脾、红骨髓及肠黏膜是铁储备的主要场所，约占全身总铁的66%。测定血清铁蛋白是判断体内铁贮储量的重要指标。在诊断缺铁性贫血、铁负荷过度、营养状况调查等方面都有重要意义。铁蛋白作为一种肿瘤标志物，对临床某些恶性肿瘤的诊断也具有一定的参考价值。

参考值范围

男性<322纳克/毫升（ng/mL）；女性<219纳克/毫升（ng/mL）

减低

见于缺铁性贫血、失血等。(无并发症）

铁缺乏：男性<24μg/L，女性<11μg/L。

增高

见于恶性肿瘤、急性肝炎、急性感染、慢性肾病、血色素沉着症、戈谢病、慢性炎症性疾病等。

铁过负荷：男性>336μg/L，女性>307μg/L。血色病铁蛋白常>1000μg/L。

原因

血清铁蛋白升高原因是铁蛋白的来源增加或存在清除障碍。如患肝癌、肺癌、胰癌、白血病等时，癌细胞合成的铁蛋白增加，使血清铁蛋白升高。患肝病时肝细胞受损功能下降，使血清铁蛋白升高。

肝癌患者有铁蛋白增高的原因可能是：

①肝癌细胞能合成和分泌铁蛋白或异铁蛋白。

②肝癌组织对铁蛋白的摄取及清除受到影响。

③肝细胞损害坏死，贮存在肝细胞浆中的铁蛋白溢入血中。血清铁蛋白虽非特异性，但除肝癌、胰腺癌中度升高外，其它消化道肿瘤如食管癌、胃癌、直结肠癌均不升高。

症状

铁蛋白偏高的症状有以下几点：

1、由于肝癌是肝脏细胞癌变，所以会出现肝区隐痛或间歇性的钝痛或胀痛，上腹胀痛等。

2、初期的肝癌症状隐匿极深，往往只是出现食欲不振，上腹闷涨和乏力，B超检查会出现轻度肝肿大。

3、四肢乏力，消瘦，全身衰弱易疲劳等症状，中晚期往往通常是卧床不起。