血乳酸编辑

体内糖代谢的中间产物

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血乳酸，即Blood LaCTic Acid，是体内糖代谢的中间产物，主要由红细胞、横纹肌和脑组织产生，血液中的乳酸浓度主要取决于肝脏及肾脏的合成速度和代谢率。在某些病理情况下（如呼吸衰竭或循环衰竭时），可引起组织缺氧，由于缺氧可引起体内乳酸升高。另外，体内葡萄糖代谢过程中，如糖酵解速度增加，剧烈运动、脱水时，也可引起体内乳酸升高。体内乳酸升高可引起乳酸中毒。检查血乳酸水平，可提示潜在疾病的严重程度。

（2）血浆及血清乳酸测定（比色法）：以氧化型辅酶Ⅰ（NAD）作氢受体，LDH催化L-乳酸脱氢，生成丙酮酸，NAD转变成还原型辅酶Ⅰ（NADH）。酚嗪二甲酯硫酸盐（PMS）将NADH的氢传递给氯化硝基四氮唑蓝（NBT），使其还原。在530nm波长的吸光度与乳酸含量呈线性关系。

试剂

（1）全血乳酸测定（分光光度法）：

①50g/L偏磷酸（MPA）：称取5.0g MPA，溶于蒸馏水中，并稀释到100ml，新鲜配制。

②30g/L偏磷酸：称取3.0g MPA，溶于蒸馏水中，并稀释到100ml，新鲜配制。

③Tris-硫酸肼缓冲液，pH9.6（Tris 79mmol/L；硫酸肼400mmol/L）；取1mol/L氢氧化钠350ml，加入Tris 4.79g，硫酸肼26g，EDTA-Na2 0.93g，以1mol/L氢氧化钠调至pH 9.6，用蒸馏水稀释到500ml，4℃保存可稳定8天。

④27mmol/L NAD溶液：根据需要量称取NAD溶于蒸馏水中，4℃可稳定48h。

⑤LDH溶液：取LDH原液，用生理盐水稀释成1500U/ml（如用SigmaⅢ型LDH，该制品从牛心提制，每毫升含10mG蛋白，每毫克蛋白具有LDH活性400～600U，用盐水稀释成3mg/ml蛋白即可）。

⑥1mmol/L（9.08mg/dl）乳酸标准液：精确称取L-乳酸锂9.6mg（或DL-乳酸锂19.2mg），以少量蒸馏水溶解，加入25μl浓硫酸，用蒸馏水稀释到100ml，4℃保存可长期稳定。

（2）血浆及血清乳酸测定（比色法）：

①0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 9.0）：取Tris 12.12g，溶于约800ml蒸馏水中，加入TritonX-100 40ml，混匀，以1mol/L盐酸调节至pH9.0，蒸馏水稀释至1L。

②无乳酸蛋白液：取Sephadex G25，用蒸馏水充分溶胀后装柱。层析柱内径16mm，装柱高360mm。有蒸馏水反复流洗后，取20ml肝功能试验正常的混合血清上柱，用蒸馏水洗脱。待洗脱物开始出现混浊时收集，共收集20ml，加入少许氯化钠（约0.1g）及叠氮钠20mg，置冰箱保存。按本法测定乳酸（即无乳酸蛋白液代替标本进行测定），测定管与对照管吸光度之差应小于0.015。可按100ml上述缓冲液加无乳酸蛋白液5ml，混合后置冰箱保存。

③乳酸脱氢酶溶液：用全血法。

④5mmol/L乳酸标准液：溶解DL-乳酸锂96mg或L-乳酸锂48mg于蒸馏水中并稀释至100ml，4℃保存。LDH只催化L（+）-乳酸。

⑤呈色剂：溶解NBT82mg于20ml蒸馏水中，可稍加热助溶，不溶物需离心去除。再加入NAD200mg，最后中入PMS 5mg，混合后置棕色瓶中，4℃保存，至少可用6个月。

操作方法

（1）全血乳酸测定（分光光度法）①应在空腹及休息状态下抽血。不用止血带，不可用力握拳。如用止血带，应在穿刺后除去止血带2min后再抽血。最好用肝素化的注射器抽血，抽取后立即注入预先称量的含冰冷蛋白沉淀剂的试管中。如用血浆测定，每毫升血用10mg氟化钠及2mg草酸钾抗凝，立即冷却标本，并在15min内离心。

抽血前试管编号，称重（Wt）并记录。加入6ml MPA（50g/L），再称重（Wm）后放入冰浴中，每份标本最好作双管分析。抽血后，立即注入上述试管中，每管2ml。颠倒混合3次，不可产生气泡。待试管温度与室温平衡后，再称重（Wb）。静置至少15min后，离心沉淀（400r/min，15min）。上清液必须澄清。计算稀释因数D：

D=Wb－Wt/Wb－Wm

②偏磷酸在水溶液易中形成多聚体（HPO3），水化成正磷酸（HPO3+H2O→H3PO4）。正磷酸不沉淀蛋白质，偏磷酸溶液沉淀蛋白的能力在4℃时仅能维持大约1周。

③本法线性范围达5.6mmol/L（50mg/dl）。

④本法不用过氯酸作蛋白沉淀剂。

⑤一般乳酸锂未标明L-或DL-者，均为DL-型，L-型乳酸锂价格昂贵。

（2）血浆及血清乳酸测定（比色法）混匀后，用分光光度计在530nm波长，10mm光径比色杯，以蒸馏水调零读取各管吸光度。

①本法条件下，NBT还原生成物在反应液中十分稳定，无混浊和沉淀，吸光度久置不变。

②肝素抗凝血浆、血库ACD保养液抗凝血浆、脑脊液、尿液、胃液等均可用本法测定。

③加入蛋白质对反应及生成物溶液的稳定是必要的。同时加入蛋白质及表面活性剂，可提高灵敏度及稳定性。Brij-35和TritonX-100有同样效果。人血清白蛋白中含乳酸浓度较高，不适用。因人血清白蛋白的显色强度平均较牛血清白蛋白高1.06倍，如用牛血清白蛋白，且仅加于标准管中时，标准管吸光度须乘此数。

④无乳酸蛋白液可与缓冲液预先混合后再加入1ml，代替表2中分别加入。

⑤本法线性范围达8.0mmol/L（73mg/dl）。

⑥吸光度随孵育时间延长而增加，必须准确10min。加入0.1mol/L盐酸后吸光度不变。

⑦抗凝剂用肝素-氟化钠较好（1mg肝素，6mg氟化钠可抗凝5ml血）。血液抽出后，血标本管置冰浴中送检，尽快分离血浆，放冰室保存待测。草酸钾对LDH有一定抑制作用，抽血较少而草酸钾相对多时尤为明显。

正常值

（1）全血乳酸测定（分光光度法）：全血乳酸0.5～1.7mmol/L（5～15mg/dl）。尿液乳酸为5.5～22mmol/24h。

（2）血浆及血清乳酸测定（比色法）：小于2.4mmol/L（22.0mg/dl，呈正偏态分布，95%百分位数上限）。

临床意义

组织严重缺氧可导致三羧酸循环中丙酮酸需氧氧化的障碍，丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增强，血中乳酸与丙酮酸比值增高及乳酸增加，甚至高达25mmol/L。这种极值的出现标志着细胞氧化过程的恶化，并与显著的呼吸增强、虚弱、疲劳、恍惚及最后昏迷相联系。即使酸中毒及低氧血症已得到处理，此种高乳酸血症常为不可逆的。见于休克的不可逆期、无酮中毒的糖尿病昏迷和各种疾病的终末期。

在休克、心失代偿、血液病和肺功能不全时，常见的低氧血症同时有高乳酸血症，在低氧血症及原发条件处理后常是可逆的。在肝脏灌流量降低的病例，乳酸由肝的移除显著降低，会出现乳酸酸中毒。