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CT值 编辑
为了定量衡量组织对于X光的吸收率, Hounsfield定义了一个新的标度“CT值”。为了表示对他的敬意,后人将CT值的单位定为“Hu” 。
荧光荧光值的设定 在实时荧光PCR中,ct值是指每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值的缺损设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,即:threshold = 10XSD cycle 6-15
研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
荧光域值(threshold): PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值是PCR 3-15个循环荧光信号标准差的10倍,即threshold=10×Sdcycle 6-15。荧光域值设定在PCR扩增的指数期。
CT值: 从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。