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醋酸杆菌 编辑
醋是由醋酸杆菌发酵产生的。醋酸的酸味很强烈,家庭用的食醋中只含有3~6%的醋酸。在发酵过程中,细菌还能产生一些诸如乙酸乙酯一类的产物,使醋有好闻的香气。
利用醋酸杆菌对水果进行发酵还能制造出易贮藏,又好吃的甜食果脯。
醋酸杆菌还能将山梨中的山梨醇转化成山梨糖,这在自然界中少有,却是合成VC的主要原料。
醋酸杆菌具有较强的氧化能力,它可使水果腐败、蔬菜腐烂、酒类和果汁变质。
醋酸杆菌能将酒进一步氧化成醋酸。造酒时如果条件掌握不好,醋酸杆菌就会将美酒变成醋酸。所以,酿酒师傅总是把酒桶盖的严严实实,不让醋酸杆菌混入酒桶。
材料
样品:取发酵成熟的固体醋醅30g。
试剂:1%三氯化铁溶液,革兰氏染色液,0.1mol/LNaOH标准溶液,1%酚酞指示剂,无菌水等。
器皿:平皿,三角瓶,吸管,试管,玻璃珠等。
方法与步骤
富集培养
灭菌后,取500mL三角瓶装入30mL米曲汁液体培养基(其中含有0.0002%结晶紫和3%-5%的乙醇),加入1-2g样品经30℃振荡培养24h,若测定增殖液的pH明显下降、有醋味、镜检细胞革兰氏染色、形态与醋酸菌符合即可分离。
倾注法分离
①取增殖液1mL于装有9mL无菌水三角瓶中(内含玻璃珠数粒),摇匀后,以10倍稀释法依次稀释至10-7,然后分别取10-7、10-6、10-5三个稀释度的稀释液各1mL置于无菌平皿中,每个稀释度平行两个平皿 ;②熔化米曲汁碳酸钙培养基,稍冷后加入3%的无水乙醇,摇匀,待冷至45℃-50℃,迅速倾入上述各皿,轻轻摇匀,待凝固后置于30℃,保温培养2-3d。观察小菌落的出现,醋酸菌因产生醋酸溶解了培养基中的碳酸钙,而使菌落周围产生透明圈,圈的大小因菌而异。
③挑透明圈不同的菌落于米曲汁碳酸钙乙醇斜面培养基上,30℃培养24-48h。
性能测定
将上述各分离株分别接入米曲汁液体培养基中(300mL三角瓶装有20mL培养基),加无水乙醇至终浓度为5%,30℃振荡培养24h。
①镜检:细胞呈整齐的椭圆或短杆状。
②醋酸的定性分析:取发酵液5mL于洁净的试管中,用10%NaOH液中和,加l%三氯化铁溶液2-3滴,摇匀,加热至沸,如有红褐色沉淀产生而原发酵液已变得五色,即可证明是醋酸。
③生酸量的测定:取发酵液1mL于250mL三角瓶中,加中性蒸馏水20mL、酚酞指示剂2滴,用0.1mol氢氧化钠溶液滴定至微红色,计算产酸量。