-
银染 编辑
检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的方法
银染是一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的方法,其原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上显色。银染的方法种类很多,有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别地清楚。由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于 1ng 的蛋白质点,故广泛地用在 2D 凝胶分析上,及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。
实验目的
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
实验原理
在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。
试剂:乙醇、冰醋酸(纯乙酸)、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或 EDTA. Na2.2H2O、甲醛
实验操作程序
固定:30min或者更长时间 100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏:30min 75ml乙醇 30%乙醇
17g乙酸钠 28.2g三水乙酸钠
0.5g硫代硫酸钠(大苏打)
加水到终体积250ml
水洗:3 x 10min
银染:20min 0.625g AgNO3
100ul 37%甲醛(在使用前加入)
加水到终体积250ml
水洗:2 x 1 min (注意把握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色偏黄色)
显色:视情况而定 6.25 g Na2CO3
50ul 37%甲醛(在使用前加入)
加水到终体积250ml
终止:10min 3.65g EDTA. Na2.2H2O或者1g甘氨酸
加水到终体积250ml
保存:1%冰醋酸,4 ℃