超薄切片技术 编辑

透射电镜样品制备方法
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超薄切片技术透射电镜样品制备方法中最基本的一种。由于电子束穿透能的限制,透射电镜观察的样品必须很薄。普通光镜切片厚度通常不低于5um,而透射电镜所需要超薄切片的厚度则要求小于100nm。超薄切片制备技术包括:取材、固定、脱、浸透、包埋、切片及染色。

基本信息

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中文名:超薄切片技术

外文名:ultramicrotomy

应用:透射电镜样品制备

领域:生物显微技术

简介

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超薄切片系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片。为了观察生物体的微细结构,电子显微镜所用的超薄切片, 需要经过了解取材的基本要求,取材和制备超薄切片的过程, 即为透射电镜标本(超薄切片)的制备 。

基本要求

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组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:

(1)动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液。

(2)所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因

固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定。

(3)机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤

(4)操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性防止细胞自溶。

(5)取材部位要准确 。

取材

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将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较血液组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定。

制备超薄切片的设备为超薄切片机,使用的刀为玻璃刀或钻石刀。为了能切成薄片,包埋标本的包埋剂一定要达到一定的硬度,通常是用树脂聚合包埋。

应用

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超薄切片技术是一种常见的透射电镜制样技术,在材料科学领域有着非常广泛的应用,尤其适合有机高分子材料和无机粉体材料,可以非常简单方便的获得纳米级切片,供透射电镜观察;对金属材料和其它无机材料也有一定的应用。另外,因为这一技术也可以非常方便的获得样品的截面信息,因此在扫描电镜和原子力显微镜制样方面也有一定的应用 。

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