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胰蛋白酶 编辑
中文名：胰蛋白酶
外文名：Trypsin
CAS登录号：9002-07-7
胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，短时间煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。
牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。
胰蛋白酶原的激活过程
胰蛋白酶降解物分析
来源
本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶，按干燥品计算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。
制法要求
本品应从检疫合格的猪、羊或牛胰中提取，所用动物的种属应明确，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求，本品为动物来源，工艺中应进行病毒的安全性控制。
性状
本品为白色或类白色结晶性粉末。
鉴别
取本品约2mg，置白色点滴板上，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2mL，搅匀，即显紫色。
检查
酸度
取本品，加水溶解并制成每1mL中含2mg的溶液，依法测定（通则0631），pH值应为5.0～7.0。
溶液的澄清度
取本品，加0.9%氯化钠溶液溶解并制成每1mL中含10mg的溶液，依法检查（通则0902第一法），溶液应澄清。
糜蛋白酶
照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定。
底物溶液：取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9mL与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1mL，混合，pH值为7.0）50mL，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀，冰冻保存，但不得反复冻融。
供试品溶液：取本品适量，精密称定，加0.001mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含0.25mg的溶液。
测定法：取底物溶液2.0mL、0.001mol/L盐酸溶液0.2mL与上述磷酸盐缓冲液（pH7.0）1mL，混匀，作为空白。 精密量取供试品溶液0.2mL，加底物溶液（预热至25℃±0.5℃）3.0mL，立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃，在237nm的波长处，每隔30秒读取吸光度，共5分钟，每30秒钟吸光度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3分钟，以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。
式中，P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；
A2为直线上开始的吸光度；
A1为直线上终止的吸光度；
T为A2至A1读数的时间，分；
W为测定液中含供试品的量，mg;
0.0075为在上述条件下，吸光度每分钟改变0.0075，即相当于1个糜蛋白酶单位。
限度：每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。
干燥失重
取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过5.0%（通则0831）。
效价测定
照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定。
底物溶液
制成后应在2小时内使用，取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐85.7mg，加水溶解使成100mL，作为底物原液，取10mL，用磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液13mL与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液87mL混合，pH值为7.6）稀释成100mL，恒温于25.0℃±0.5℃，以水作空白，在253nm的波长处测定吸光度，必要时可用上述底物原液或磷酸盐缓冲液调节，使吸光度在0.575~0.585之间。
供试品溶液
取本品适量，精密称定，加0.001mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50~60胰蛋白酶单 位的溶液。
测定法
取底物溶液3.0mL，加0.001mol/L盐酸溶液200µL，混匀，作为空白。另精密量取供试品溶液200µL，加底物溶液（恒温于25.0℃±0.5℃）3.0mL，立即计时，混匀，使比色池内的温度保持在25.0℃±0.5℃在253nm的波长处，每 隔30秒读取吸光度，共5分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图；每30秒吸光度的改变应恒定在0.015~0.018之间，呈线性关系的时间不得少于3分钟。若不符合上述要求，应调整供试品溶液的浓度，再作测定。在上述吸光度对时间的关系图中，取成直线部分的吸光度，按下式计算。
式中，P为每1mg供试品中含胰蛋白酶的量，单位；
A1为直线上终止的吸光度；
A2为直线上开始的吸光度；
T为A1至A2读数的时间，分钟；
W为测定液中含供试品的量，mg；
0.003为在上述条件下，吸光度每分钟改变0.003，即相当于1个胰蛋白酶单位。
类别
蛋白分解酶。
贮藏
遮光，密封，在阴凉干燥处保存。
制剂
注射用胰蛋白酶。
药理作用
胰蛋白酶为肽链内切酶，对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用，可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸。由于血清中含有非特异性抑肽酶，故胰蛋白酶不会消化正常组织，而能分解黏痰、脓性痰等黏性分泌物，能促进抗生素、化疗药物向病灶渗透。
适应症
1、用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、娄管等所产生的局部水肿、血肿、脓肿。
2、用于呼吸道疾患溶解黏痰和脓性痰。
3、用于治疗毒蛇咬伤，曾试用于竹叶青、银环蛇、眼镜蛇、蝮蛇等毒蛇咬伤的各型病人800余例，均获治愈。
禁忌症
2、不可用于急性炎症及出血空腔中。
用法用量
1、每次2.5～5mg，用蒸馏水5～10mL溶解。
2、一般应用：1次5000单位，每日1次肌注，用量酌情而定。为防止疼痛，可加适量普鲁卡因。局部用药视情而定，可配成溶液制剂（PH7.4～8.2，微碱性时活性最强）、喷雾剂、粉剂、油膏等，用作体腔内注射、患部注射、喷雾、湿敷、涂搽等。
3、治蛇毒：取注射用结晶胰蛋白酶2000单位1～3支，加0.25%～0.5%盐酸普鲁卡因（或注射用水）4～20mL稀释，以牙痕为中心，在伤口周围作浸润注射，或在肿胀部位上方作环状封闭1～2次。如病情需要可重复使用。若伤肢肿胀明显，可于注射本品30分钟后，切开伤口排毒减压（严重出血者例外），也可在肿胀部位针刺排毒。如伤口已坏死、溃烂，可用其0.1%溶液湿敷患处
注意事项
1、不可作静注。用前需作划痕试验，应注意可能产生过敏反应。
2、吸取注射液后应另换针头，以免注射时疼痛。
3、外用时，可采用注射用制剂以缓冲液溶解，但必须在3小时内用毕。
不良反应
1、注射局部疼痛、硬结。
2、本品可引起组胺释放，产生全身反应，有寒战、发热、头痛、头晕、胸痛、腹痛、皮疹、血管神经性水肿、呼吸困难、眼压升高、白细胞减少等。症状轻时不影响继续治疗，给予抗组胺药和对症药物即可控制，严重时应即停药。
