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接种 编辑
中文名:接种
外文名:iNOculation
微生物学术语:接种 inoculation,按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。
食用菌栽培学术语:接种 inoculation ,将食、药用菌菌种移植在培养基物中的方法、过程。也叫“播种 spawning ”。
1 人员素质
1.1 接种人员要具备认真、细致、自觉、对事业负责的精神。
1.2 接种人员要牢固树立无菌观念,不能存在侥幸心理,切不可麻痹大意。
1.3 接种人员具备鉴别菌种优势的能力,不合格的菌种不能用于生产。
2 环境消毒
2.1 新制作的或是闲置时间超过15天的接种箱,首次使用前,箱体内、外需用0.1%升汞水或2%来苏儿彻底刷洗消毒。
2.2 闲置超过30天的接种室和缓冲间重新使用前,墙壁需用2%来苏儿喷湿消毒。对新改建或闲置3个月以上没用的接种室,使用前,室内墙壁要用石灰浆粉刷,水泥地面用清水冲刷。
3 空间消毒
将待接种的培养基放入接种箱或接种室后,需对箱或室内进行空间消毒。
3.1 如果是母种传代或接种量少的原种,可利用接种箱同时放入所用的接种工具,然后用化学药物熏蒸或紫外线照射进行空间消毒30分钟。
3.2 如果是量大的原种或三级种生产,培养基放入接种室,同时放入所用的接种工具,再用化学药物熏蒸,同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟左右。
3.3 缓冲间内放置作业服、消毒水、面盆等,接种前要在缓冲间内做好一切准备工作。进入前开启紫外线灯照射30分钟,离开缓冲间进入接种室时仍需开启紫外线灯照射,直至接种结束。
4 携带物消毒
4.1 将母种试管或原种瓶(袋)的棉塞齐管或瓶口剪去,母种试管用75%酒精棉擦洗外壁,原种瓶(袋)用0.25%高锰酸钾水清洗外壁,然后随接种人员带入接种箱(室)。
4.2 接种人员经过缓冲间更衣、洗手进入接种室后不得随便出入,尽量少走动和避免空气对流。
5 杀菌
利用酒精火焰进行必要的杀菌。
5.1 首先将接种工具(钩、铲、刀等)在酒精灯火焰上烧灼后,置于清洁的空试管内冷却备用。
5.2 将试管母种或原种瓶放在万能夹上,旋转式取下棉塞,右手端起酒精灯,让火焰接触管口或瓶口,左手将试管或原种瓶慢慢旋转3~4周,然后将试管或原种瓶固定牢。
6 接种
母种分离、传代或扩繁时,试管口要控制在离酒精火焰10cm范围内进行操作。6.1 用杀菌后的备用接种钩,除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块,随后将接种钩放回母种试管。 左手持预接种的试管培养基,管口稍向下倾斜,用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩,从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块,放入预接种培养基斜面中央,抽出接种钩,放回母种试管,轻燎右手所持棉塞,旋转式塞入接过菌的试管,由右手放到适当位置,连续完成所有预接种试管。
注意:①每次接种时间最长不得连续超过2小时。②操作时,接种工具尖端和种块不能接触到管口和外部其它物体。工具尖端碰到外面物体要重换工具,种块碰到外面物体则作废。③一般用种量:每支试管母种可扩繁一级种100支左右;扩接原种6~8瓶。
6.2 原种接栽培袋的方法
菌种处理。一是入接种室前用75%的酒精或其它杀菌药剂将菌种袋(瓶)擦洗一遍。二是接种前再用75%的酒精将菌种袋擦一遍。三是接种时从瓶(袋)底开始接,上部留1——2公分不用。
操作规范。一是接种必须3人一班,一人运袋擦袋,一人打眼封口,一人接入菌种。二是接种速度要敏捷,随打眼,随接种,随封口。三是接种时间安排在晚上九点以后或阴天,以免灰尘大增加污染。四是短时间内一次接完,接完后再用气雾消毒剂薰蒸一次。
7 两种特殊接种法
7.1 密环菌传代扩繁时,要趁培养基有凝结水时进行,接人种块直径不能小于0.5mm,同时还要带有菌索。每支试管培养基可同时接入3块母种,每块母种都要用接种工具按压至母种块陷入培养基约2mm,以利菌索尽快伸入培养基;接种原种时,每支试管可接种原种3~4瓶。
7.2 元蘑菌传代扩繁时,种块直径不能小于0.3mm。接种时,将种块从试管培养基尾部约1.5cm处顺斜面中间纵向划线至斜面尖端约2cm处放下种块,此法可使培养周期缩短3天左右。
8 安全
8.1 点燃的酒精灯不能靠近棉塞、塑料等易燃物。
8.2 点燃的酒精灯要放牢,在操作过程中严防将酒精灯碰翻,以免引起火灾。
8.3 接种箱或接种室利用化学药物进行空间消毒时,要计算空间容积,按照用药说明使用,不许任意加大用药量,避免造成药害。
8.4 紫外线可损伤人体,特别是可引起电光性眼炎。因此,不要在开启紫外线灯的情况下工作,更不能直视正在开启的紫外线灯。