精子顶体酶编辑

存在于精子顶体内膜及赤道部膜上

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顶体酶存在于精子顶体内膜及赤道部膜上，通常以无活性形式存在，当精子头部进入卵透明带时，顶体酶原才被激活为顶体酶。此酶是受精过程中不可缺少的一种中性蛋白水解酶，其作用类似于胰蛋白酶，它能水解卵透明带糖蛋白，使精子穿过卵丘再穿过透明带，使精子与卵子融合；它还能促使生殖道中激肽释放，从而增强精子的活力和促进精子的运动。

（1）精子的洗涤和顶体酶的提取：取0.25ml液化的精液于塑料离心管中，以500×g离心5min；弃上清，将离心管在吸水纸上倒置，以除去剩余溶液，再加0.25ml 2%的醋酸溶液，放4℃冰箱内抽提过夜（16～24h），取出后以1000×g离心10min，取上清备用。

（2）测定过程：在比色杯内依次加入用pH8.7 0.05mol/L Tris-HCl缓冲液新鲜配制的NAD（1mg/ml）0.1ml，BAEE1mg/ml 0.5ml，ADH（3.46mg/ml）0.1ml和Tris-HCl缓冲液2.25ml，均匀混合后25℃下预温5min，再加入0.05ml顶体酶抽提液立即混合均匀，记录加入酶液后10min，反应液在366nm下吸光度的变化值（△A366mm/10min）。

（3）酶活力单位的定义和酶活力的计算：1个毫单位（mu）的顶体酶活力等于在上述反应条件下（pH8.5和25℃），每分钟水解1nmol/L的BAEE所需要的顶体酶量。水解1nmol/L的BAEE使反应液的吸光度变化0.0011，t是反应时间（10min），△A是在t分钟内吸光度的变化值，V是加入酶液的体积（0.05ml），因为抽提液的体积和原始精液体积相同，所以，公式计算的就是每毫升精液内的顶体酶活力。