IgG抗体 编辑

哺乳类动物抗体
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哺乳类动物抗体(又称免疫球蛋白,immuNOglobulin,简称Ig)的种型之一。抵抗病原入侵的抗体相关免疫,主要由该种型下的四种类型所提供,也是唯一一种可以穿过胎盘胎儿提供被动免疫力的种型。

基本信息

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中文名:IgG抗体

外文名:immunoglobulinG

作用:激活补体,中和种毒素的作用

唯一能:在母亲妊娠期胎盘保护胎儿的抗体

基本信息

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IgG抗体(immunoglobulin G)在免疫应答中起着激活补体,中和多种毒素的作用。IgG抗体持续时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。它们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿第一时间得到抗体保护。IgG是四链单体,占血清Ig总的75%,是血清和细胞外液中最主要的抗体成分,可将人IgG分为四个亚类,依其在血清中浓度高低,分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG自出生后三个月开始合成,三到五岁接近成人平。主要由脏和淋巴结中的浆细胞产生,血清半衰期较长,约20~23天,是再次体液免疫应答产生的主要抗体,其亲和力高,在体内广泛分布,具有重要的免疫效应,是机体感染的主力军,故临床使用丙种球蛋白进行免疫治疗时,应以每2~3周注射一次为宜。

IgG1、IgG3、IgG4可穿过胎盘屏障,在新生儿抗感染免疫中起重要作用;IgG1、IgG2、IgG4可通过其Fc段与葡萄球菌蛋白A(SPA)结合,借此可纯化抗体,或用于免疫诊断;IgG1、IgG3可高效激活补体,并可与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合,发挥调理作用、ADCC作用;某些自身抗体和引起二、三型超敏反应的抗体也属于IgG。

功能

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1.激活补体经典途径,介导溶菌细胞毒作用

2.介导ADCC效应;

3.调理吞噬作用

4.结合SPA;

5.中和毒素和病毒。

在抗感染免疫尤其是再次免疫应答中发挥重要作用。IgG类自身抗体参与Ⅱ、Ⅲ型超敏反应

抗体技术

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粗提法提取球蛋白

大多用盐析法或硫酸钠盐析法。硫酸铵盐析须经过多次沉淀,第一次用40%饱和度,第二次用35%饱和度,第三次用33%饱和度,经三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸法更简便,用20%即可将γ球蛋白沉淀出来。经盐析后的γ球蛋白虽大多属于IgG,但还有5%其他区带蛋白,如γ区的杂蛋白。又因IgG组分中还含其他所谓正常的IgG,产生干扰。因此盐析法粗提的γ球蛋白只能用于一般的实验,或者是抗体效价较高的抗血清。

离子交换层析法提取IgG

常用的离子交换剂有DEAE纤维素或QAE纤维素,以QAE-Sephadex最为理想,DE22、32、52也可应用。取QAE-SephadexA25或A50经酸处理并在0.05mol/LpH7.5~8.6的磷酸缓冲液中平衡,将水分抽干,称湿重Ig加于10ml血清中,在室温30min后,离或过滤除去离子交换剂。上清液再如此处理一次,即获得较纯的IgG,甚至不含其他杂蛋白。用该技术纯化IgG简便,不损坏抗体,既可小量提取,也可大量制备。

亲和层析法提取特异性IgG

将纯化抗原或粗制抗原(如是单价特异性则对抗原要求不高)交联Sepharose4B制成亲和层析柱,将抗血清过柱后洗去未结合的杂蛋白,再用硫氰酸钾洗脱,流出的是纯的特异性IgG抗体。因硫氰酸钾对抗体有破坏作用,应及时透析除去。纯化的IgG因含量低,失去保护作用,应及时应用或冻干保存,亦可20℃保存,但皆不理想;加入三乙醇胺或甘油可起保护作用。

解法制备F2片段

蛋白酶对IgG的作用点是在连接两重链的二硫键C端处(232氨基酸处),结果两个Fab由二硫键连接,保留了抗体的结合点。与IgG相比,F(ab')2的特点是去掉了Fc段,这样在细胞免疫实验中免除了受体作用;同时也使IgG失去主要的抗原特性,不被抗IgG抗体结合;在反向间接血凝中,用F(ab')2致敏红细胞比用IgG效果好。

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