中文名：放射免疫

利用同位素标记的与未标记的抗原同抗体发生竞争性抑制反应的放射性同位素体外微量分析方法。又称竞争性饱和分析法。1960年美国化学家R.S.耶洛和S.A.贝尔森提出此法，耶洛因此于1977年获得诺贝尔生理学或医学奖。

耶洛1921年生于纽约。父母都是犹太人，她从小酷爱自然科学。在大学里，她热衷于物理学，却致力於医学研究，她工作於纽约市布隆克斯区退伍军人医院，致力于「胜太荷尔蒙的放射免疫分析」。居里夫人自传和核子物理学家美籍意大利人费米的讲演，对她后来的事业产生了很大的影响。她渴望从事科学研究工作。然而，当时的美国，哪个大学也不同意将一笔物理学奖金给一个女人。她主动给一位杰出的化学家当非全日制秘书。由于工作出色，几个月后，伊利诺依大学给了她一份奖学金，并给了她一个助理研究员的位置。从1941年到1945年，她把主要精力都用在三项活动上：教学、钻研高深课题和准备核物理博士论文。她于1945年获得博士学位。从1945年起，她边授课，边研究，边著书立说，并在勃隆克斯医院筹备和开发新的放射性同位素应用工作。

早在得奖的二十多年，耶洛便在一个偶然的机会里，发现猪胰脏的胰岛素可用来治疗糖尿病，可以使病人产生抗体。这种发现与当时的治疗理论不太合适。因为治疗药物能引起抗体是不可思议的事，因此其发现并不为当时的人所接受。然而，这个发现却引导近代内分泌学的研究进入了新的境界，更由此而推展，使得已往不易测定的身体中的物质得以测定。这个方法就是放射免疫测定法，又叫放射免疫测定法（radioimmuNOassav，简称RIA）。80年代初，应用此法测定的生物活性物质已达300种以上。

原理

使放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。*Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性，两者以竞争性的方式与抗体Ab结合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,在一定反应时间后达到动态平衡。如果反应系统内加入的*Ag和Ab的量是恒定的,且*Ag和Ag的总和大于Ab有效结合点时,则*Ag-Ab生成量受Ag量的限制。Ag增多时，Ag-Ab生成量也增多，而*Ag-Ab生成量则相对地减少,同时游离*Ag也增多。因此,*Ag-Ab与Ag的含量呈一定的函数关系。如采用一种有效的分离方法，将*Ag-Ab和Ag-Ab复合物 (以 B表示)与*Ag、Ag(以F表示)分离,并测定B和F的放射性,可有以下规律:如样品中Ag增多，则B的放射性降低，F的放射性增高，即Ag与B成反比。计算B/F或B/T值 (T=B+F),即可算出样品中Ag的含量。由于 RIA是以放射性标记与非标记抗原竞争性地与抗体结合为理论基础，故又称为竞争性放射饱和分析法。

测定方法

分别在一定数量的试管中加入不同浓度的标准抗原（或未知样品），每管加入等量的放射性标记抗原和一定量的抗体，在4℃或37℃下保温,待反应平衡后,选用适当的方法将B和F分离，测量放

放射免疫分析法

射性强度,由放射性强度比B/T对Ag量制出标准曲线,即可从标准曲线上查出未知样品量。

测定时，首先要制备出纯的抗原和抗体。凡能刺激机体产生抗体，且与抗体发生特异性结合反应的物质通称为抗原，例如蛋白质(细菌、病毒、异种血清等)。只有反应原性而无免疫原性的物质称为不完全抗原或半抗原，如多糖、类脂和一些小分子物质。可用化学方法把一些半抗原与载体（蛋白质的大分子）结合而获得免疫原性,这种结合为RIA 开辟了广泛的应用范围。常用的载体有γ球蛋白、纤维蛋白质、鸡卵蛋白、血蓝蛋白和各种甲状腺球蛋白。半抗原结合载体是由半抗原的功能基团与载体功能基团所决定，一般连接后不应引起半抗原结构改变，也不使载体蛋白变性。常用结合载体的方法有混合酸碱法、水溶性的羰二亚胺法等。

抗体是能与相应抗原或半抗原专一地结合的免疫球蛋白分子。应用免疫技术可以获得特异性的抗体。抗体的敏感度范围由其特异性和亲和力决定，测定时所用的抗体稀释度越低，则加入的量越多，测定的敏感度越低，可测范围越宽。如加入抗体量少，则测定的敏感度提高，可测范围变窄。一般在选定标记抗原用量后，即可根据测定要求来选择合适的抗血清用量。

常用于标记抗原的放射性同位素有3H、125I、131I 等，3H可以置换有机化合物中的氢，且不影响原有化学性质。3H半衰期长，能量低，便于防护，常用的标记化合物有3H环磷酸鸟苷、3H环磷酸腺苷、3H睾丸酮等。125I 和131I原子的化学性质比较活泼,标记方法简便,不论多肽、蛋白质或小分子半抗原均可进行碘标记。有些半抗原不能直接用碘标记, 常常接上一个酪氨酸再以碘标记,以减少标记抗原免疫化学活性的损失。常用的偶联试剂有：碳化二亚胺类、异?唑盐类、烷基氯甲酸酯类、二异氰酸盐类及亚氨酸酯等。

应用

此法用于在内分泌学中测定胰岛素、生长激素、甲状旁腺激素、血管紧张素、催乳素、黄体化激素、促卵泡成熟激素、前列腺素等，以鉴别、诊断、研究激素的生理和药理作用，目前较多用于研究激素与受体结合的机理。在传染病学方面广泛用于乙型肝炎抗原的亚型分类测定。在临床免疫学上测定免疫球蛋白 G、免疫球蛋白E及抗脱氧核糖核酸抗体;进一步的应用包括甲状腺球蛋白抗体、类风湿。

放射免疫分析法

因子、补体及抗食物抗原抗体的测定。在肿瘤学方面用于测定癌胚抗原、血纤维蛋白溶酶原、叶酸、维生素B12以及血纤维蛋白原和血纤维蛋白降解产物。根据已建立的人绒毛膜促性腺激素、癌胚抗原和甲胎蛋白的RIA结果,为有效地初筛和在手术后追踪释放这些蛋白质的肿瘤提供了参考依据。在药理学方面可测定吗啡、氯丙嗪、苯妥英钠、庆大霉素、地高辛、茶碱等，是检测药物中毒和药物代谢的一个比较迅速和简便的方法。

优缺点

RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等，常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质，但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物，此示踪物的放射性强度极低，一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应，组织样品处理不够迅速，不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等。

展望

在本法的基础上，近年来又发展了其他免疫分析法，用其他有特殊性质的物质代替放射性同位素来标记抗原，同样利用标记与未标记抗原与抗体的竞争性结合，然后用适宜方法测定。其中研究较多的是荧光免疫分析，采用荧光化合物标记抗原，结合分离后通过荧光值的测定进行定量分析。

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附件：

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检测内容:

近半年研究所合作单位的主要检测内容，粗略统计为300多项：其中

1.北京天坛医院、北京市神经外科研究所：脑源性神经营养因子BDNF、神经营养因子-3（NT-3）、血管细胞间粘附因子VCAM-1、细胞间粘附因子ICAM-1、神经生长因子NGF、前列腺素PGE2、血管内皮生长因子VEGF。

2.北京大学医学部：BMP2、胰岛素INS、血脂四项：HDL、LDL、TG、TC；BUN、甲状旁腺素PTH、exendin-4。

3.北京中医药大学：大鼠血清测定，神经激肽A（NKA）、血管活性肠肽VIP、促血小板生成素TPO、促红细胞生成素EPO、血管内皮生长因子VEGF、降钙素基因相关多肽CGRP、白介素系列：IL-1IL-6；6-酮、TXB2、磷脂酶A2、促肾上腺皮质激素ACTH、B-内啡肽等；常规生化检测、抗氧化指标检测:如：SOD、MDA、NO、NOS、GSH-PX、CAT、T-AOC、XOD、ATP酶、脂肪酶、谷氨酰转移酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、单胺氧化酶A、单胺氧化酶B；酶免检测：巨噬细胞炎性蛋白la、组织因子TF、纤维连接蛋白FN、血清凋亡因子sfasl/sfas、血清同型半胱氨酸HCY、白三烯、羟基壬烯酸HNE。

4.北京友谊医院：廋素、脂联素

5.北京复兴医院:脑钠素、红细胞生成素

6.内蒙古农业大学：鸡血清检测抗氧化指标如：SOD、MDA、NO、NOS、IGG/IGA/IGM、游离脂肪酸等；酶免检测：CD4、CD3、CD8、活性维生素D3、一型胶原氨基酸前肽；放免检测如，甲状腺系列PTH、胰岛素生长因子、白介素系列、降钙素、促肾上腺皮质激素、生长激素、骨桥蛋白、骨保护素、生长素ghrelin、SS、瘦素、促性腺激素释放激素GNRH等。

7.北京体育大学：人血浆检测生化指标HDL、LDL、TG、TC、BUN;放免法测定E2、ET-1、ANP、INS、AI；皮质醇、血管紧张素II、肾上腺素(ADR)、去甲肾上腺素(NOR)、抗利尿激素AVP。

8.首都医科大学：大鼠血清检测多巴胺DA、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、生长抑素、血管活性肠肽、极低密度脂蛋白OXLDL、内皮素、血管内皮生长因子VEGF、脑钠素BNP。

9.南京农业大学：鸭组织测定白介素-1、白介素-6、猪血清测定，促性腺激素释放激素GNRH、促黄体生成激素LH。

10.沈阳农业大学：小鼠血清检测；胰岛素INS、促甲状腺素TSH、促性腺激素T、LH等。

11.南京中医药大学：大鼠血清检测；IL-1、IL-6、；酶免检测：CD4、CD8、P选择素CD62P。

12.浙江中医药大学：大鼠血浆测定，T、E2、TXB2、6-酮、AI、AII、ALD、CGRP、ANP、CAMP、CGMP。

13.黑龙江中医药大学：大鼠脑组织测定IL-1、IL-6、PGE2、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷。

15.湖南中医药大学：人血清测定胃泌素、前列腺素PGE2、IL-1、IL-10、TNF、抗氧化指标如：SOD、MDA。

16.武汉工业学院：猪血浆测定：瘦素、C-反应蛋白、白介素-15、脂联素、抵抗素。

17.上海市第二军医大学：大鼠细胞培养液测定皮质酮、孕酮、雌二醇、环磷酸腺苷。

18.中国中医科学院：大鼠血清检测；IL-2、IL-5、IL-10、r-干扰素、免疫球蛋白IGG/A/M、胃动素、胃泌素、胃动素受体、胃泌素受体。

20.中国农业科学院：鸡血清检测胰岛素、瘦素、脂联素、抵抗素、极低密度脂蛋白OXLDL。

21.苏州大学医学院：羊血浆测定抗氧化指标SOD、MDA、NO、NOS；放免检测如：血管紧张素转化酶ACE、AI、AII、ALD、INS、AVP、ET-1、PGE2、TXB2、LEP、催产素OT、IGF-2、AFP等。

22.安贞医院：人血浆测定皮质醇、血管紧张素II、肾上腺素(ADR)、去甲肾上腺素(NOR)。

23.中国中医科学院西苑医院：小鼠测定环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、白介素-6、内皮素、抗氧化指标检测:如：SOD、MDA、NO。

24.中国中医科学院广安门医院：人血浆测定，6-酮、TXB2、ET-1、AII。

25.福建农林大学：猪血清测定T3、T4、TSH、GH、TNF、PRL等。

26.内蒙古草原研究所：大鼠血清放免法测定，睾酮、孕酮、雌二醇、雌三醇、皮质酮、促黄体生成素、促滤泡成熟激素、促性腺激素释放激素、醛固酮、褪黑素、前列腺素E2、生长激素、肿瘤坏死因子、促绒毛膜性腺激素、促肾上腺素释放激素；酶免法检测：双氢睾酮DHT、雌酮E1、甲羟孕酮MPA、雄烯二酮ASD、FSH受体、LH受体。

27.苏州大学附属第一医院：人血清测定促红细胞生成素EPO、叶酸、维生素B12。

28.兰州大学第一医院：大鼠血清检测；胰高血糖样多肽GIP-1、可溶性内皮细胞蛋白C受体、胰岛素、消脂素、胃泌素、抗氧化指标检测:如：SOD、MDA、NO、血脂、游离脂肪酸。

29.江西南昌大学医学院：兔血清检测性腺激素如:FSH、E2、P、PRL、T、LH。

30.哈尔滨医科大学：人血清测定褪黑素。

31.新疆石河子大学：人血清测定胰岛素生长因子-1、胰岛素生长因子-2。

32.深圳儿童医院：人唾液测定表皮生长因子EGF。

33.宣武医院：人血清测定白介素-6、白介素-10、肿瘤坏死因子TNF.。

34.广州市中医医院：人血浆测定，胃动素、胃泌素、生长抑素、瘦素、酪酪肽、血管活性肠肽。

35.中国中医科学院基础医学研究所：大鼠血浆测定P物质、组胺、钙离子。

36.中日友好医院:大鼠血清检测生化指标；ALT、AST、ALP、r-谷氨酰胺、总胆红素、直接胆红素。

37.广安门医院:FSH、LH、PRL、T、IL-1B、TGF-B1、ET-1、AII、TXB2、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原、转化生长因子-B1(TGF-B1)、整合素连接激酶-1(ILK-1)、结缔组织生长因子(CTGF)、肝细胞生长因子(HGF)、骨形成蛋白-7（BMP-7)、IL-8、瘦素、分泌型IgA、CD4、CD8、NK细胞活性、IGG、IGA、IL-2、IFN-γ、sandwich酶免法。

38.东方医院前列腺素E2、胃泌素GAS、表皮生长因子EGF、胃蛋白酶原II、SOD、MDA;

39.西苑医院白细胞介素-1、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、心肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、环磷酸腺苷CAMP、环磷酸鸟苷CGMP、超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA、肿瘤坏死因子TNF-α、C-反应蛋白、一氧化氮、血栓素、6-酮、内皮素;

40.海军总医院β-内啡肽、五羟色胺、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮合成酶;

41.北方交通大学：T3、T4、ACTH、CORT等

42.新疆农业大学：绵羊血清检测抗利尿激素AVP、醛固酮、肾素、促肾上腺皮质激素、皮质酮、性腺激素测定如：HCG、E2、P、E3、FSH、LH；微量元素钙、铁、铜、锌、镁。

43.中国农业大学：羊血清测生化指标BUN、TC、TG、ALB、TOC、IGA/G/M、等；牛血清抗氧化指标检测:如：SOD、MDA、NO、NOS、GSH-PX、CAT、胰蛋白酶、脂肪酶、糜蛋白酶、淀粉酶、乳糖酶等；放免检测如r-干扰素、皮质酮、醛固酮、生长激素、褪黑素、垂体泌乳素等；酶免检测：肾上腺素(ADR)、去甲肾上腺素(NOR)、转化生长因子TGF-B2、甲状腺过氧化物酶TPO、脱碘酶、极低密度脂蛋白OXLDL；鸡蛋中测定粗脂肪、甘油三酯、总胆固醇的含量。

44.解放军总医院等IL-4、γ-干扰素。

45、北京军区总医院中介素。