电泳缓冲液 编辑

电泳场中的导体
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电泳缓冲液核酸蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成, 是电泳场中的导体,也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。其成分及其离子强度影 响物质的电泳迁移率,应避免与被分离的样 品发生化学反应而改变样品的理化性质或使 其丧失生物活性。电泳缓冲液中的EDTA 可螯合Mg离子二价阳离子防止电泳时激 活DNA及Mg离子与核酸生成沉淀

基本信息

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中文名:电泳缓冲液

释义:进行分子电泳时所使用的缓冲溶液

作用:稳定体系酸碱度

常见缓冲液:TAE、TBE、TPE和MOPS等

隶属:核酸、蛋白质凝胶电泳系统

特点:使用广泛

作用

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缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),阴极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能,使溶液两极的pH保持基本不变。

电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。

特点

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TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。

TPE的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。

配制方法

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50×TAE Buffer 配制方法:

1。称量氨基丁三醇 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中;

2。向烧杯中加入约600ml去离子,充分搅拌均匀;

3。加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解

4。用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。

使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer

10×TBE Buffer配制方法:

1。称量氨基丁三醇 108g,Na2EDTA.2H2O 7.44g,硼酸55g 于1L烧杯中;

2。加入约700ml去离子水,搅拌均匀;

3。用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。

使用时稀释10倍 即1×TBE Buffer

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