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TAE缓冲液 编辑
TAE缓冲液(TAE Buffer)是由三羟甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)和乙二胺四乙酸(EDTA)组成的缓冲液,英文名为三种组成成分的首字母。在分子生物学实验中常被用作DNA或RNA进行凝胶电泳时的缓冲液。是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04 mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2 mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种(TBE和TPE)缓冲液快约10%,电泳大于13 kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
50×TAE Buffer 配制方法:
1.称量Tris 242 g,Na2EDTA·2H2O 37.2 g于1 L烧杯中;2.
加入57.1 ml的冰乙酸,充分搅拌;4.
加去离子水定容至1 L后,室温保存。
使用时稀释50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE