伊红美蓝培养基 编辑

曙红亚甲蓝琼脂培养基
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伊红美蓝培养基(eosin-methylene blue medium,简称EMB medium),一般用于检测大肠杆菌。伊红为酸性染料,美蓝为碱性染料。伊红美蓝琼脂培养基在药典中又名曙红亚甲蓝琼脂培养基。

基本信息

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中文名:伊红美蓝琼脂培养基

外文名:eosin-methyleneblueagarmedium;EMBagarmedium

别名:曙红亚甲蓝琼脂培养基

简称:EMB

原理

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当大肠杆菌分解乳产酸时细菌正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基,可用来鉴别饮用乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌,因其强烈分解乳糖而产生大的混合酸,菌体带H+,故菌落被染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

鉴定方法

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用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌

步骤如下:

①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用。

②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1:10稀释。

③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。

④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18~24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中呈暗蓝黑色,发金属光泽。

⑤将菌落接种于斜面培养基上(由营养琼脂培养基制成)。

配置方法

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配方

蛋白胨 10g

乳糖 10g

磷酸二钾 2g

琼脂 20~30g

蒸馏水 1000ml

2%伊红水溶液 20ml

0.5 %美蓝水溶液 13ml

储备培养基

先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后加入酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。

制法

将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正PH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。