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吉姆萨染色 编辑
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但该法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长,可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染。
中文名:吉姆萨染色
外文名:Giemsa
组成:天青,伊红
特点:PH对细胞染色有一些影响
吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境里正电荷增多,易和伊红结合,染色为偏红;在偏碱性环境里负电荷增多,易和美蓝或天青结合,染色偏蓝。所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片一定清洁,要无酸碱污染。配制顼特液一定用优质甲醇,稀释染色一定用缓冲液,冲洗一定用水应近中性,不然可导致各种细胞染色反应异常,以致于识别困难,甚至造成错误的判断。
(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐,即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。即伊红和伊混合後,产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料。
(2)细胞的染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用,各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。因此,用本染料液染色後,在同一血片上,可以看到各种不同的色彩,例如血红蛋白,嗜酸性颗粒是碱性蛋白质,和酸性染料伊红结果,染粉红色,称之为嗜酸性物质;细胞核蛋白与淋巴细胞 胞浆是酸性,和碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称之为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态和伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称之为中性物质。
(3)PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。 因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一定时间,待染料成熟,主要是美蓝逐渐转变为天青B後才能使用,贮存时愈久,染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。
rA测定方法如下:取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定),加甲醇10ml稀释,混匀後以甲醇为空折管,分别以波长650nm和525nm比色。Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm,伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。所以新配染料rA接近2,随著美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降。RA下降到1.3±0.1时即可使用。瑞特染液贮存过程中,必须塞严,以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸。有人主张在配方中加入甘油30ml,防止甲醇挥发,关可合细胞染色清晰。甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏酸,使白细胞著色不良。
为发观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变化,血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。常用瑞特染色法。